ماکی دام

دام، طیور، آبزیان

کد خبر: 2985
بازدید: 73
تاریخ انتشار: ۱۳۹۸/۴/۹ ساعت: 12:24:20 PM

روش‌های آزمایشگاهی تشخیص لپتوسپیروز

جهت تعیین میزان شیوع لپتوسپیروز در یک دامپروری لازم است از 15 تا 20 درصد دام‌ها (از سنین مختلف) نمونه‌های خون اخذ و به آزمایشگاه لپتوسپیروز ارسال گردد.

روش‌های آزمایشگاهی تشخیص لپتوسپیروز

به گزارش «سرویس دام، طیور و آبزیان» «ماکی دام - پایگاه خبری صنعت دام، طیور و آبزیان»؛ جهت تعیین میزان شیوع لپتوسپیروز در یک دامپروری لازم است از 15 تا 20 درصد دام‌ها (از سنین مختلف) نمونه‌های خون اخذ و به آزمایشگاه لپتوسپیروز ارسال گردد.

در صورت شک به بیماری در دام یا انسان و به منظور ارسال نمونه به آزمایشگاه اكیدا توصیه می‌شود قبل از هر اقدامی با آزمایشگاه تماس گرفته و هماهنگی لازم بعمل آید تا نمونه در شرایط استاندارد تحویل آزمایشگاه گردد.

نمونه‌های مورد نیاز جهت ارسال به آزمایشگاه

1) سرم خون: در اغلب موارد تنها نمونه مورد نیاز جهت تشخیص بیماری، سرم خون بیمار می‌باشد. برای تهیه این نمونه کافی است حدود 4 میلی‌لیتر خون کامل در لوله‌های ساده و بدون ماده ضدانعقاد اخذ و پس از حدود یک ساعت نگهداری در دمای اتاق، سرم آن مستقیماً به یک لوله اپندروف منتقل گردد. ظرف اپندروف كه حاوی حدود یك میلی‌لیتر سرم خون می‌باشد را در مجاورت یخ قرار داده (فلاكس حاوی یخ خشک) و همراه با برچسب و نامه‌ای كه حاوی مشخصات كامل بیمار و مبدا ارسال‌كننده باشد به آزمایشگاه ارسال گردد. بهتر است همراه هر نمونه ارسالی فرم مخصوص ارسال نمونه تكمیل و به آزمایشگاه ارسال گردد.

2) ادرار (برای جداسازی باکتری): در شرایط بهداشتی و تمیز مقدار 10 تا 25 میلی‌لیتر از وسط جریان ادرار (Mid-stream urine sample) در ظروف استریل درپیچ‌دار تهیه می‌شود، ادرار جمع‌آوری شده به دو قسمت تقسیم و یک قسمت آن به ظرف استریل دیگری منتقل شده و به آن 0.5% تا 1% فرمالین خالص فیلتر شده افزوده می‌شود (100 میکرولیتر فرمالین + 10 میلی‌لیتر ادرار). هر دو ظرف نمونه ادرار با هماهنگی قبلی به آزمایشگاه ارسال می‌شود . نمونه‌های ادرار (به منظور آزمایش مستقیم و یا كشت) در ظروفی محكم محتوی یخ و دور از تابش نور همراه با نامه‌ای كه مشخصات صاحب نمونه و آدرس و تلفن وی بر روی آن نوشته می‌شود در كوتاه‌ترین زمان ممكن (كمتر از یک ساعت) به آزمایشگاه ارسال گردد.

توجه: نمونه ادرار حتماً قبل از شروع درمان با آنتی‌بیوتیک، باید اخذ شود تا امكان جداسازی و یا مشاهده باكتری لپتوسپیرا میسر شود.

نکته مهم: با توجه به دوام کوتاه مدت باکتری در نمونه ادرار، قبل از اخذ نمونه حتماً با آزمایشگاه هماهنگی شود، تا از آماده بودن مقدمات آزمایش مطمئن شوید.

روش‌های آزمایشگاهی تشخیص بیماری

آزمایش آگلوتیناسیون میكروسكپی (Microscopic Agglutination Test) با استفاده آنتی‌ژن زنده سروتیپ‌های شایع لپتوسپیرا در منطقه، این آزمایش روش استاندارد WHO در تشخیص لپتوسپیروز معرفی گردیده است. تیتر 400/1 در نمونه اول خون و یا افزایش دو برابر تیتر در نمونه دوم نشانه قطعی بیماری است.

- كشت نمونه های مرضی (خون یا ادرار) در محیط اختصاصی

- آزمایش پادتن‌های درخشان (IFA (Indirect Flurscent Antibody

- آزمایش مستقیم نمونه‌های مرضی به كمک میكروسكپ زمینه تاریک

- تكنیک PCR) Polymerase Chane Reaction)

- تكنیک REA Restriction Endonuclase Analysis جهت تشخیص ژنوتیپ سویه‌های جدا شده

- روش الیزا ELISA 

- تزریق به حیوانات آزمایشگاهی

روش‌های باكتریولوژیک (Bacteriologic Methods) در تشخیص لپتوسپیروز

 تهیه محیط كشت:

1) محیط كورتف (Kortof’s Medium): مواد زیر در 920 میلی‌لیتر آب مقطر حل شود:

Pepton ...................................... 0.8 gr

NaCl ......................................... 1.4 gr

NaHCO3 ................................ 0.02 gr

Kcl .......................................... 0.04 gr

CaCl2 ..................................... 0.04 gr

KH2PO4 ................................. 0.24 gr

Na2 HPO4 .............................. 0.88 gr

به مدت 20 دقیقه آنها را بجوشانید سپس یک شب در دمای 4 درجه و بعد آن را فیلتر كرده و سپس اتوكلاو نموده و 8 تا 10% سرم خرگوش استریل غیرفعال شده به آن افزوده و pH نهایی را به 4/7 می‌رسانیم.

2) محیط فلتچر (Fletcher Mediu): مواد زیر در 920 میلی‌لیتر آب مقطر حل شود:

Peptone ................................. 0.3 gr

Beef Extract ........................... 0.2 gr

NaCl ....................................... 0.5 gr

Agar ....................................... 1.5 gr

محلول فوق را به مدت 15 دقیقه در دمای 121 درجه اتوكلاو نموده و 8 تا 10% سرم خرگوش استریل غیرفعال شده به آن افزوده و pH نهایی را به4/7 می‌رسانیم.

3) محیط استوارت (Stuart’s Medium): مواد زیر در 995 میلی‌لیتر آب مقطر حل شود:

Asparagine .......................... 0.132 gr

NH4Cl .................................. 0.268 gr

MgCl2-6H2O ....................... 0.406 gr

NaCl .................................... 1.808 gr

Na2 HPO4 ........................... 0.666 gr

KH2PO4 .............................. 0.087 gr

Phenol red ............................. 0.01 gr

Glycerine ................................ 5.0 ml

محلول فوق را به مدت 15 دقیقه در دمای 121 درجه اتوكلاو نموده و 8 تا 10% سرم خرگوش استریل غیرفعال شده به آن افزوده و pH نهایی را به 7.4 می‌رسانیم.

4) محیط اختصاصی EMJH كه به صورت تجاری توسط شركت دیفكو و یا شركت BBL تهیه و توزیع می‌گردد.

5) محیط اختصاصی GRA Sina كه در آزمایشگاه تحقیقاتی لپتوسپیروز تهیه می‌گردد و اکنون جایگزین محیط EMJH شده و بشکل‌های مایع و نیمه جامد همراه با آنتی‌بیوتیک جهت جداسازی باکتری در فیلد مورد استفاده قرار می‌گیرد و از کارایی بسیار خوبی برخوردار می‌باشد. در صورت نیاز می‌توانید سفارش خرید این محیط را به آزمایشگاه تحقیقاتی لپتوسپیروز ارسال نمایید.

برای مطالعه بخش‌های تکمیلی این مطلب کلیک کنید: بیماری لپتوسپیروز (Leptospirosis)


نام:
پست الکترونیک:
نظر:
*
نظر شما با موفقیت ارسال شد.
نظر شما حداکثر تا 24 ساعت آینده بررسی می شود
ارسال نظر
نظرات حاوی توهین و افترا منتشر نخواهد شد
نظرات به زبانهایی به غیر از زبان فارسی منتشر نخواهد شد
نظرات غیر مرتبط با این خبر منتشر نخواهد شد.
نام:
پست الکترونیک:
نظر:
*
 

عناوین اصلی